鄰苯二甲酸氫鉀標準溶液

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【KHC₈H₄O₄】鄰苯二甲酸氫鉀標準溶液 (CAS:877-24-7)

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【KHC₈H₄O₄】鄰苯二甲酸氫鉀標準溶液 (CAS:877-24-7)

濃縮汁樣品接種操作程序

1．將樣品表面（指容器表面）用75%酒精棉球消毒后，連同做樣中用的滅菌緩沖稀釋液（每個錐形瓶含90ml）、抽濾瓶、沖洗水（用于沖洗膜器,不含干擾純培養的菌類的清水）、自來水（用于冷卻水浴后的樣品液）、滅菌的膜過濾器（可用高壓蒸汽滅菌法，也可將干燥的膜濾器置于超凈臺上接受紫外線照射殺菌）、滅菌濾膜（先用75%酒精浸泡消毒，再浸泡于無菌水中）、滅菌的平皿和吸管（裝于銅筒中于160℃恒溫干燥箱中滅菌1h）及錐形瓶、消毒棉球、裝有滅菌培養基的容器、滅菌紗布等拿入無菌室。然后打開超凈工作臺電源開關，再依次打開超凈臺、無菌室、緩沖間的紫外燈，對拿入的物品表面及室內空間進行滅菌。

2．紫外線照射1h后，依次關閉緩沖間、無菌室、超凈臺的紫外燈，同時開啟超凈臺風機，接通水浴鍋電源，設定溫度為80℃。出來時將需要加熱或融化的培養基拿出并于電爐上加熱。

3．約20min后，將電爐加溫的培養基組A和加熱完全融化的固體培養基拿入無菌室，置于水浴鍋上保持其熔融狀態。

4．用香皂洗凈手，穿戴好工作服、帽、嘴巴罩，換鞋后進入無菌室，用消毒棉球對手包括手腕及指甲縫中進行仔細擦拭消毒至少2min。

5．在超凈工作臺上將組A倒入組B中并充分混合，待不燙手后將混合培養基傾入幾個滅菌平皿中，每個以15~20ml為宜，制成平板，放涼備用。

6．將天平至調至平衡，取一并無菌稀釋液輕置于左盤中，然后用鑷子給右盤上添加砝碼并調節天平刻度旋鈕至橫梁重新平衡后，再補加10g砝碼重量。

7．用滅菌剪刀在小無菌袋上適當位置剪一小口，然后用10ml滅菌吸管吸取足量濃汁放放天平左盤上的無菌稀釋液中至天平重新平衡（即試樣量為10g，制成1稀釋液），然后打開平皿蓋，并使其與平皿底呈45度角，將吸管中剩余果汁分別放入滅菌平皿中，每個平皿接種1ml（有時根據實際需要可以增多或減少試樣量；有時也可進行1∶10、1∶100等更大稀釋度的檢測）用于“菌落總數”或“酵母＆霉菌”的檢測培養。蓋好平皿蓋，用特種鉛筆作上樣品名稱、檢樣量和做樣時間等標記。

8．輕輕將天平上的樣品稀釋液取下，塞上塞子和包扎紙，搖勻后，浸入到80±1℃水浴鍋中（水位蕞好不低于錐形瓶中樣品稀釋液的液位）加熱殺菌10min。加熱過程中要對樣品稀釋液進行振搖以加快傳熱。

9．將水浴殺菌好的樣品稀釋液從水浴鍋中移至自來水中冷卻備用。

10．重復6~9步驟做下一個樣品。

11．將放涼至不燙手且尚在熔融狀態的平板計數瓊脂培養基、馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基傾入到相應的含有試樣的平皿中，每個平皿中約倒入培養基15~20ml，立即將蓋好蓋的平皿朝同一方向快速水平轉動振搖，使樣品充分混勻到培養基中。

12．在超凈工作臺上，將滅菌的膜過濾器水平安置在抽濾瓶上，用滅菌鑷子將濾膜置于過濾器濾板上，并避免側漏。從冷水中取出樣品稀釋液，用干紗布擦去瓶壁上的水分，然后將樣液小心地傾入膜過濾器中，加蓋后（可用75%灑精棉球將蓋內面擦濕以加強所密性，防止微生物侵染），用真空泵抽濾干凈。

13．將抽濾瓶放回到超凈臺上，打開膜過濾器，用滅菌鑷子夾緊濾膜邊緣（過濾區外圍），將其截留面朝上帖放在耐熱菌培養基平板上，并與平板良好接觸，之間不得存有空氣。

14．重復12、13步驟，抽濾下一個樣品稀釋液。注意在抽濾下一個樣品稀釋液前，當估計到上一個樣品稀釋液中耐熱菌的數量少到不影響下一個樣品稀釋液的檢測結果時，可直接置膜抽濾下一個樣品稀釋液。否則，應用裝在洗瓶中的凈水沖洗一下膜過濾器，并對鑷子灼燒滅菌后（也可用0.2%新潔爾滅溶液對其工作部位殺菌），再給膜過濾器放置下一張濾膜。

15．用滅菌吸管吸取40ml濃汁樣品注入到滅菌錐形瓶中，加入3.5ml15%的滅菌的碳酸鈉溶液，調其pH為中性或接近于中性。然后按GB/T4789.3規定進行大腸菌群測定。接種量選擇10ml、1ml、10^－1ml。

16．待全部樣處理完畢，切斷水浴鍋電源，關閉超凈臺風機及電源。立即將所有已冷卻的培養皿拿出無菌室，按不同培養目的分別倒置放入設置為不同溫度恒溫培養箱，在不同條件下培養。（如果是平板涂布法接種的培養皿則應先正放幾小時待接種的樣液較為干燥后再倒置）。

17．清理無菌室，清洗用過的物品。（蕞好不用洗潔精清洗錐形瓶，以避免殘余的清洗劑對下一次檢測樣液中可能存在的微生物發生抑制作用。）

18．填寫微生物檢驗原始記錄表。

更新時間：2023/8/27 11:37:41